形質転換によるプラスミドDNAの大腸菌への導入

大腸菌を塩化カルシウム溶液で処理すると膜の透過性が変化し、外来DNAを取り込みやすくなる。DNAを取り込みやすくした細胞をコンピテントセルと呼ぶ。

方法（Hanahanらの方法）

1. 凍結しておいたコンピテントセル（大腸菌）を氷上で融解

2. 100mlのコンピテントセルに、10ngのDNA溶液（7ml程度）を添加、混和する。

3. 氷中で30min放置（DNAが大腸菌に取り込まれる）

4. 42度で2min加温し、直ちに氷冷する。

5. 抗生物質を含まない培地を1ml添加し、37度で1hr培養する。

6. 抗生物質（例えば50mg/ml Ampicillin）を添加したLB寒天培地にコンピテントセルを植え込む。

7. 37度で一晩（12-18hr）培養すると、プラスミドを取り込んだ大腸菌は、抗生物質に耐性を獲得しているので、増殖しコロニーを形成する。