【Tricine-SDS-PAGE】

1. 試薬調製

   1. 2X Gel Buffer

      • 2M Tris-HCl pH 8.45

   2. Anode Buffer (x1)

      • 0.1M Tris-HCl pH 8.9

   3. Cathode Buffer (x1)

      • 0.1M Tris, 0.1M Tricine, 0.1 % SDS (possibly pH 8.25. Do NOT adjust pH!)

   4. 4X Tris-HCl/SDS Buffer

   5. 2x Sample Buffer

2. ゲルの作成

   1. ゲルバッファーは、pH8.45のTris-HClをUpperには0.75M、Lowerには１Mで用いる。

   2. SDSを0.1%添加するべきだろう。

   3. ゲルの濃度は12.5%で良いかもしれない。

3. サンプル調製

4. 電気泳動

5. ゲルの染色

【SDS-PAGE with Tricine】

1. 通常のSDS-PAGEの条件でゲルを作成する。

2. 泳動槽にゲルを組み立てて、

   1. 下部電極には、通常のTris-Gly-SDSの泳動バッファーを入れる。

   2. 上部電極には、0.1M Tris/0.1M Tricine/ 0.1% SDSを入れる。

3. 通常のSDS-PAGEの泳動電流で泳動すると良い。電圧で言えば、普通のSDS-PAGEの6割程度電圧で泳動すると良い。

4. タンパク質は、普通のSDS-PAGEの場合よりも、より低分子領域が分離される。

12%ゲルのとき、

• Laemmliの系では、15kDaから100kDaが分離されるが、

• Tricineを使うと、5kDaから89kDa程度が分離される。