1

大腸菌（BL21(DE3) : lon-protease minus）にpGEXプラスミドをトランスフォームする。

2

 場合によっては、トランスフォーマントをシングルナイズ(単一の細胞群に)する。

3

50mlのLB+（＋は、50 ug/ml ampicillinが入っている。）で前培養する。37°C、O/N

4

翌日、新鮮なLB+（500ml：100ml x 5 flasks）に10倍希釈し、2時間培養。

5

0.1-1mM IPTGを添加し、27°C で2時間培養。GST融合タンパク質を誘導する。

6

3,000回転、15分遠心し、菌を回収。

7

PBSで菌体をケンダクし、3,000回転、15分遠心洗浄。

8

菌体に、Lysis buffer（10 ml）を添加、Lysozyme（1mg）を添加し、4°C, 30min溶菌する。

9

14,500 rpm, 20min 遠心上清

10

100ulのグルタチオン-セファロースを添加し、4^oC、2hrインキュベートする。

11

遠心し、ビーズを回収、Lysis Bufferで4回洗浄する。

12

1mMグルタチオンを添加し、4^oC、2hrインキュベートする。

13

遠心上清を回収する。