Purification of Synthetic Oligo DNA

 

1

DNA resin に、0.5mlのアンモニア水を通し15分間切り出し、これを、四回繰り返し、合計2mlのDNA抽出液を得る。

2

65°C, 1hr加熱する。

3

DNA溶液をDWで、2-3倍希釈する。

4

アセトニトリル5mlで、OPCカラムを洗浄、カラム内の液を空気で追い出し、次いで2M triethylamine-acetate(pH7.0-7.5)5mlでOPCカラムを洗浄、カラム内の液を空気で追い出す。

5

希釈DNA溶液を1滴/秒でOPCカラムに添加する。濾液をもう一度OPCカラムに添加する。

6

十倍希釈アンモニア水5mlで洗浄し、空気でカラム内の液を追い出す。

7

DW5mlで洗浄し、空気でカラム内の液を追い出す。

8

2%TFA 1mlを添加し、5分放置した後、同液4mlで洗浄、空気で追い出す。

9

DW5mlで洗浄し、空気でカラム内の液を追い出す。(二回繰り返す)

10

40-70merの場合) 十倍希釈アンモニア水5mlで洗浄、空気で追い出す。次いで、DW5mlで洗浄し、空気で液を追い出す。

11

20%acetonitril 1mlでDNAを溶出する。(空気で追い出す)

12

Speed Vacで濃縮・乾固し、0.1mlの蒸留水に溶解する。5mlをとり、DW1mlで希釈しUVスペクトルを測定する。DNA量を算出する。

13

一部を10mMに希釈し,PCR等の実験用に用いる。

DNA(mg/ml)=20 x A260nm
DNA(
mM)= 64.5 x A260nm / (Base Number)

OPC(Oligonucleotide Purification Cartridge):
  ABI Masterpiece Part No. 400771  10個一組

2M trietylamine-acetate(pH7.0-7.5):
  DW  6ml
  Acetic acid 1.16ml
  Triethylamine 約2.6ml (pH7.0-7.5に調整)
  DWで10mlにする。